Comment comprendre les résultats de cytométrie en flux

Les scientifiques utilisent la cytométrie en flux à différencier entre différents types de cellules ou d'organismes microscopiques. Il est un outil utilisé dans de nombreuses applications telles que le diagnostic médical ou de la médecine légale. Bien que cette technique expérimentale est assez facile à réaliser, l'analyse des données complexes produites par le cytomètre en flux est plus difficile en raison des multiples facteurs expérimentaux et / ou des paramètres cytomètre. En tant que tel, il est courant pour les données de cytométrie à être visualisées et analysées en utilisant les programmes professionnels sophistiqués tels que CELLQuest ou FlowJo. Familiarité avec la cytométrie de flux techniques, des machines et des logiciels est nécessaire pour comprendre les résultats produits par ces expériences.


Sommaire

  • Comprendre la cytométrie de flux de données
  • Choses que vous devez




    • FlowJo ou d'autres données de cytométrie de flux logiciel d'analyse







    • Les données brutes provenant cytomètres
    • La cytométrie en flux protocoles expérimentaux et les réglages de la machine

    Comprendre la cytométrie de flux de données

    1. Clarifier le but de l'expérience en demandant, "Quelle était la question ou l'hypothèse objet d'une enquête?" Ce sera nécessaire pour ajuster les résultats bruts au format approprié et les paramètres pour l'analyse plus loin en utilisant un logiciel de cytométrie statistique. Faites tous les changements nécessaires afin d'avoir les données affichées avec les paramètres pertinents (par exemple, les cellules positives, négatives, portes intensité de fluorescence, les populations cellulaires, etc.).

    2. Trouver portes. Les cellules peuvent être regroupés ou simplement observés regroupés sur un terrain de densité ou un diagramme de contour. Les groupes se séparent souvent en fonction de leur identité. Si un groupe de taches très intensément pour un marqueur ou d'un anticorps particulier, il est conclu que les membres de ce groupe ont tous l'identité du type Cell-spécifique, qui exprime ce marqueur. Il est fréquent de trouver des cellules qui sont positives pour plus d'un de ces marqueurs, et ces cellules sont en général un intermédiaire et notée "double positive."

    3. Regardez scattergraphs. La façon dont les groupes de cellules étalées dans un diagramme de dispersion est une indication de la taille des cellules. Les cellules avec des très grands ou élevés sont généralement disperse grande cells- cependant, ils peuvent être grands, simplement parce qu'ils contiennent une forte proportion de cytoplasme, ou ils peuvent être élevés parce qu'ils ont un très gros noyau. Selon la biologie à l'étude, cette volonté bien sûr, varient largement entre les expériences.

    4. Regardez les chiffres. Ajustez les parcelles pour afficher différents paramètres sur un axe (généralement la axe X) tout en gardant les chiffres sur l'axe Y. Ceci indique que la proportion de la population d'échantillons qui sont positifs pour ce paramètre particulier, en tant que pic est normalement observée dans un échantillon positivement colorées, qui sera absent de l'échantillon de contrôle négatif.

    5. Regardez histogrammes multiples paramètres. En ajustant l'axe X et l'axe Y représenter chacun un paramètre différent qui a été étudié au cours de l'expérience, il est possible d'obtenir une meilleure compréhension des propriétés de l'échantillon. Par exemple, en fixant l'axe X à fluorescence rouge et l'axe des Y à fluorescence verte, portes quadrant de style peuvent être calculées pour l'échantillon afin de faire apparaître quatre régions d'un quadrant dans lequel les cellules sont présentes et colorées pour rouge ou vert fluorescence, les deux couleurs, ou pas du tout. Cela permet à un échantillon hétérogène d'être divisé en ses composantes et les entités qui se chevauchent à visualiser ainsi que quantifiée.

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