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Comment effectuer le séquençage de l'pcr

Dans les premiers jours de l'analyse de l'ADN, il était essentiel pour les chercheurs et les enquêteurs de scènes de crime pour avoir de grands échantillons d'ADN pour eux d'avoir une chance de venir avec des résultats utiles. Cela a été avant la réaction de polymérisation en chaîne (PCR) a été développé séquençage. Séquençage PCR a permis aux scientifiques d'amplifier régions génomiques pour l'analyse. Merci de séquençage PCR, un chercheur légiste peut identifier un être humain avec seulement un dixième de un millionième de litre - 0,1 microlitre - de sa salive.


Sommaire

Instructions

  1. Chauffer l'ADN inconnu si ses brins appariés se séparent et les simples brins peuvent se combiner avec des amorces d'ADN.

  2. Mélanger la matrice d'ADN avec du chlorure de magnésium, des nucleotides d'ADN et d'une grande quantité d'amorces ADN. Le plus grand nombre d'amorces assure les brins d'ADN non identifiés se combinent avec des amorces et pas avec l'autre. On refroidit le mélange réactionnel ainsi brins simples se combinent avec les brins d'amorces.

  3. Ajouter ADN polymerase. ADN polymérase est une enzyme qui peut lire brins d'ADN et de les étendre en accrochant nucléotides ensemble, ce qui crée des copies de la première échantillon d'ADN non identifié.

  4. Ajouter plusieurs amorces d'ADN et nucléotides et répéter le cycle. Répétez jusqu'à ce que vous avez suffisamment d'ADN.




Conseils & Avertissements

  • La quantité de matrice d'ADN à séquencer vous avez besoin d'une PCR dépend de la taille du fragment de PCR. Par exemple, une matrice de 200 à 500 paires de bases nécessite de 25 à 100 nanogrammes de matière d'ADN.
  • Avant d'effectuer un séquençage PCR, vous devez confirmer il ya du matériel d'ADN dans l'échantillon en utilisant un test de la plaque d'éthidium bromure. Cette méthode va montrer tous, mais les plus petits échantillons.
  • Pour visualiser le séquençage PCR, placer le produit final dans un appareil d'électrophorèse sur gel.
  • Chaque fois que possible, de maintenir les concentrations d'ADN non identifié dans votre échantillon le plus haut possible. Cela permettra d'accroître la qualité et la fiabilité de vos résultats de séquençage PCR.

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